注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
2'-脫氧胸苷-5'-一酸二鈉鹽β-Amyloid (1-42 Specific) (D3E10) Rabbit mAb*基(2-基氧)硅烷

衛(wèi)茅(>99%，分子生物學(xué)級(jí))DNAJC2/MPP11 (D6B1E) Rabbit mAb三（五氟代基）硅烷

2-基膦酸(>90%,植物激素級(jí))SignalSilence® Puma siRNA I*硫基硅烷

硝酸鐵九水PAX9 (D9F1N) Rabbit mAb2，3，*基戊烷

松三糖DyLight™ 350 Phalloidin2，3，*基戊烷

聚二20000Rab11FIP1 (D9D8P) Rabbit mAb基二硅烷

對(duì)甲磺酸鈉PathScan® Total Androgen Receptor Sandwich ELISA Kit基(甲基)二甲基硅烷

高酸鈉一水(>97%,BR)β2-microglobulin (D8P1H) Rabbit mAb*基炔硅烷

SPDP；N-琥珀酰亞-(2-吡啶二硫代)酸酯BAF Complex Antibody Sampler Kit*基-2-炔氧基硅烷

2-氨基噻唑(>98%，BR)c-Myc (D84C12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)基硫*基硅烷

化鈰七水MRP4/ABCC4 (D1Z3W) Rabbit mAb三基硅烷

D-阿拉伯糖(標(biāo)準(zhǔn)品)SMYD3 (D2Q4V) Rabbit mAb氧基-*基硅烷

D-阿拉伯糖Sin1 (D7G1A) Rabbit mAb*基疊氮化硅

三六氨絡(luò)鈷;六氨基化鈷Prostatic Acid Phosphatase (D3Y5P) Rabbit mAb*基硅烷化

米吐爾(>98%,BC)uPAR (D4Q5S) Rabbit mAb（*基硅烷）甲基氟代烷

鹽酸吡哆SimpleChIP® Human StAR Intron 1 Primers氨甲基*基硅烷

硅油Glycolysis II Antibody Sampler Kit1-甲基金剛烷

溴化鈉LGP2 (D3I3L) Rabbit mAb1-羥基金剛烷

甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)ELISA試劑盒Phospho-FAK (Tyr861)  酸化粘著斑激酶500 ul

甲狀腺激素受體β(THRb)ELISA試劑盒Phospho-FAK (Tyr576/577)  酸化粘著斑激酶100 ul

甲狀腺過氧化物酶(TPO)ELISA試劑盒Phospho-FAK (Tyr925)  酸化粘著斑激酶100 ul

甲狀腺非肽激素(THAA)ELISA試劑盒Phospho-FAK (Tyr407)  酸化粘著斑激酶100 ul

甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)ELISA試劑盒phospho-FAK (Tyr577)  酸化粘著斑激酶100 ul

甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒FAF1  Fas相關(guān)1因子100 ul

甲狀旁腺激素1受體(PTH1R)ELISA試劑盒phospho-FAK (Ser732)  酸化粘著斑激酶100 ul

甲狀旁腺激素1-34(PTH 1-34)ELISA試劑盒FAK2/Pyk2  富含脯氨酸的酪氨酸激酶220 ul

甲狀旁腺激素1-34(PTH 1-34)ELISA試劑盒phospho-Pyk2 (Tyr402)  酸化富含脯氨酸的酪氨酸激酶2500 ul
腦膜炎奈瑟菌通用型PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3抗體Ethyl 2-(3-cya-4-hydroxyphenyl)-4-methyl-1,3-thiazole-5-carboxylate中文名：別名：分子式：C14H12N2O3S

GATA結(jié)合蛋白1伴侶蛋白抗體Ethyl 2-(3-cya-4-isobutoxyphenyl)-4-methyl-5-thiazolecarboxylate中文名：別名：分子式：C18H20N2O3S

F-box蛋白21抗體Ethyl 2-(3-formyl-4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate中文名：別名：分子式：C14H134S

FBXO4蛋白抗體Ethyl 2-(4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate中文名：別名：分子式：C13H133S

前列腺素E受體4相關(guān)蛋白抗體Febuxostat中文名：非布索坦別名：分子式：C16H16N2O3S
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。